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點擊次數(shù):14219 發(fā)布時間:2023/7/3 14:37:37
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍: 96T
3.5pmol/L - 160pmol/L
使用目的:
本試劑盒用于測定樣本中細(xì)胞色素P450家族成員1A1(CYP1A1)含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人細(xì)胞色素P450家族成員1A1(CYP1A1)水平。用純化的人細(xì)胞色素P450家族成員1A1(CYP1A1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入細(xì)胞色素P450家族成員1A1(CYP1A1),再與HRP標(biāo)記的細(xì)胞色素P450家族成員1A1(CYP1A1)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過CHE底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的細(xì)胞色素P450家族成員1A1(CYP1A1)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人細(xì)胞色素P450家族成員1A1(CYP1A1)濃度。
標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月
原創(chuàng)作者:上海恒遠(yuǎn)生物技術(shù)發(fā)展有限公司
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