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01.蛋白質(zhì)
雖然蛋白質(zhì)是血清的主要成分,但許多蛋白質(zhì)的功能在體外情況下所剩無幾,而有幾種有關(guān)的蛋白質(zhì)可能是需要的,例如攜帶礦物質(zhì)、脂肪酸、激素的蛋白。
已知可滿足這些需求的蛋白質(zhì)有:白蛋白,它作為脂類或礦物質(zhì)及球蛋白的一種攜帶者;纖連蛋白(冷不溶性球蛋白),它可促進細胞貼壁;α2-巨球蛋白,它是胰酶的抑制劑。此外,胎兒血清中的胎球蛋白可增進細胞的貼附;轉(zhuǎn)鐵蛋白可結(jié)合鐵離子,使其毒性減小而具有生物可利用性。其他一些未知的蛋白質(zhì)對于細胞的貼附和生長可能也是必需的。蛋白質(zhì)還可增加培養(yǎng)基的成泡性,在吹打和攪拌時可減少切力,可能還會增加培養(yǎng)基的緩沖力。
02.生長因子
自然凝集得到的血清比用物理方法(離心)去除細胞的血漿刺激細胞增殖的效果更好。這種刺激效果的增加是由于凝集過程中血小板生長因子(PDGF)的釋放。PDGF是具有有絲分裂原活性的多肽家族中的一員,可能是血清中的主要生長因子。PDGF刺激成纖維細胞和神經(jīng)膠質(zhì)細胞的生長,而其他血小板生成因子,如TGF-3,可能會抑制其生長或者促進上皮類細胞的分化。
其他生長因子,如成纖維細胞生長因子(FGF)、表皮細胞生長因子(EGF)、內(nèi)皮細胞生長因子如血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)和Angiogenin,胰島素樣生長因子IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ,都已從完整組織或培養(yǎng)過細胞的培養(yǎng)基中分離得到,各自具有不同程度的特異性,它們可能存在于血清中,但含量非常少。現(xiàn)在,許多生長因子都以重組蛋白的形式實現(xiàn)了商業(yè)化,有些還有chang效類似物(long-form analogues),可增加有絲分裂原的活性和穩(wěn)定性。
03.激素
胰島素可促進細胞對葡萄糖和氨基酸的攝取,這可能是由于具有有絲分裂原的作用從而產(chǎn)生這一特性或增加了IGF-Ⅰ受體的活性。IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ可結(jié)合于胰島素受體,但它們也有自己的特異性受體,而胰島素與這些受體的親和力很低,IGF-Ⅱ也可刺激葡萄糖的攝取。血清中含有生長激素,特別是胎兒期的血清,生長激素與促生長因子(IGFs)結(jié)合可能具有有絲分裂原的效果。血清中還有含量不等的氫化ke的松,特別是在胎牛血清中,它可促進細胞的附著和增殖,但在特定的條件下(如高細胞密度)可能使細胞靜止,還能夠誘導細胞的分化。
04.營養(yǎng)物及代謝物
血清可能還含有氨基酸、葡萄糖、酮酸、核苷及其他一些營養(yǎng)物質(zhì)和中間代謝物,對于成分簡單的培養(yǎng)基,這些物質(zhì)可能很重要;而對于那些成分復雜的培養(yǎng)基,特別是含有高濃度氨基酸和其他補充物的培養(yǎng)基,這些物質(zhì)就不那么重要了。
05.脂類
血清中含少量脂肪酸、亞油酸、油酸、乙醇胺和磷酸一乙醇胺,它們通常結(jié)合于蛋白質(zhì)如白蛋白上。
06.礦物質(zhì)
血清替代實驗表明微量元素及鐵、銅、鋅都可能結(jié)合于血清蛋白質(zhì)。McKeehan等已證實血清中的硒是細胞培養(yǎng)所需求的,它可能作為谷胱甘肽(GSH)合成酶的輔助因子有助于消除自由基的毒性。
07.抑制物
血清中可能也含有抑制細胞增殖的物質(zhì),其中一些可能是血清制備過程的產(chǎn)物(例如,來源于過濾之污染的細菌毒素或抗體,其含有γ-球蛋白的片段能夠與培養(yǎng)細胞的表面結(jié)合位點產(chǎn)生交叉反應),而另一些是生理上的非生長調(diào)節(jié)因子,例如TGF-β。熱滅活可去除血清中的一些物質(zhì),減少免疫球蛋白的細胞毒性而不破壞多肽生長因子,但也可能去除一些較不穩(wěn)定的成分,因而并不總是比未處理的血清安全。
原創(chuàng)作者:上海恒遠生物技術(shù)發(fā)展有限公司
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